分光荧光光度计测试时有哪些注意事项?
分光荧光光度计是一种测量荧光光谱的仪器。目前已经广泛应用于各行各业,特别是医学领域。由于分光荧光光度计使用方法简单,测量结果准确,所以更受市场欢迎。但是使用分光荧光光度计时一定要注意方式方法,否则会造成测量数据不准确,影响实验效果。以下是详细的注意事项:
①样品应盛在四面透光的石英比色皿(荧光池)中,如果是挥发性样品应使用带塞的荧光池。
②在使用分光荧光光度计荧光分析时,为了得到稳定可靠的数据,一般需要开机预热氙灯大约30min。如果仪器光源采用的是闪烁氙灯,预热时间可以缩短到10min左右。对某些易感光、易分解的荧光物质,可以降低人射光强度或缩短光照时间。
③温度变化可引起分光荧光光度计荧光强度的改变。通常降低温度,有利于提高荧光量子产率,荧光强度增大。温度影响荧光强度的显着程度因样品而异,大部分荧光物质的荧光强度受温度影响不大,测试温度变化不超过±3℃,对测试结果几乎无影响。
④当分光荧光光度计的荧光物质是弱酸或弱碱时,溶液的pH对荧光强度有较大影响。因为弱酸或弱碱在不同酸度中,分子和离子的电离平衡会发生改变,而荧光物质的荧光强度会因其离解状态发生改变。
⑤分光荧光光度计的荧光物质分子与溶液中其它物质分子之间作用导致荧光强度降低,常见的荧光猝灭剂,如卤素离子、氧气重金属离子、硝基化物质、重氮化合物等。溶液中的溶解氧也能引起几乎所有的荧光物质产生不同程度的荧光熄灭现象,因此,在较严格的荧光实验中必须除氧。